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Le plasmide de protocole

Les scientifiques utilisent le protocole de plasmide maxiprep quand ils ont besoin pour extraire de grandes quantités d'ADN plasmidique à partir d'une culture cellulaire. En fait, la seule différence majeure entre les protocoles miniprep, Midiprep et Maxiprep est la quantité de culture cellulaire utilisé et ainsi le plasmide ADN total a abouti. Conformément au protocole Maxiprep Promega, il existe trois étapes essentielles.

  1. Culture Cellulaire



    • Transformé, ou contenant un plasmide, des bactéries E. coli sont cultivées sur une plaque de gélose et utilisée pour inoculer 100 à 200 ml de milieu Luria-Bertani (LB) de bouillon. La culture est ensuite placée sur une plaque d'agitation dans un incubateur à 37 C ° et on le laisse se développer pendant 12 à 21 heures. Volume de cellule optimale est obtenue en 12 à 16 heures.

      • Lyse cellulaire




      • La culture bactérienne est culotté aide d'une centrifugeuse et le supernant ou de bouillon peut être soutiré. Une solution d'hydroxyde de sodium et le dodécylsulfate de sodium (SDS) est ajouté au culot à induire la lyse cellulaire. En raison du grand volume des cellules, des précautions doivent être prises pour assurer que le culot de cellules complètement remet en suspension dans la solution. Sinon, toutes les cellules ne seront lysées et le rendement d'ADN plasmidique potentiel est sévèrement touchés.

      Extraction de l'ADN

      • Extraction d'ADN plasmidique utilise une solution alcaline, en ce hydroxyde de sodium cas, pour dénaturer l'ADN plasmidique et d'ADN génomique (bactérienne). Lorsque la solution est ramenée à un pH neutre, l'ADN plasmidique étant beaucoup plus petite que l'ADN génomique est susceptible de ré-annelage. L'ADN génomique à partir de la solution des précipités lors de la centrifugation ou l'extraction de la colonne sous vide en laissant un ADN plasmidique pur relativement à la suspension ou lié à la colonne.

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